1)提取、純化、捕獲 (1)樣本種類: A:人源:血漿、血清、尿液、胸水; B:鼠源、兔源:血漿、血清; C:細胞來源:細胞培養(yǎng)上清、細胞; (2)方法: ①超速離心法:本公司配備Thermo Scientific? Sorvall? MX Plus 系列落地式微量超高速離心機,高效分離EVs和外泌體。 ②免疫分離法:特制生物芯片包被EV普適性抗體(如CD9、CD63、CD81等)或腫瘤特異性抗體(如PDL-1等),精準分離、純化、捕獲EVs和外泌體。 ③PEG沉淀提取富集法:采用Thermo Scientific等公司的PEG沉淀試劑盒,結合本公司特有的納米生物芯片富集技術,高通量、高速提取EVs和外泌體。 ④脂質體納米顆粒捕獲法:采用本公司生產的陽離子脂質體納米顆粒,高效原位捕獲帶負電的EVs和外泌體。 ⑤濃縮超濾法:采用Merk等公司的濃縮柱,結合本公司特有的納米生物芯片富集技術,高效分離、純化EVs和外泌體。
2)表征
本公司主要采用電鏡、DLS (動態(tài)光散射)和NTA (納米粒子示蹤分析)方法對EVs和外泌體形態(tài)、粒徑、電位、數量等進行表征。
電鏡圖 | 粒徑電位圖(血漿標本) |
電鏡圖 | 粒徑電位圖(細胞上清標本) |
Zhou J, Wu Z, Hu J, Yang D, Chen X, Wang Q, Liu J, Dou M, Peng W, Wu Y, Wang W, Xie C, Wang M, Song Y, Zeng H, Bai C. Sci Adv. 2020 Nov 20;6(47):eabc1204.
3)生物標志物檢測 (1)RNA:包括miRNA、mRNA、circRNA、lncRNA等RNA靶標,包括探針的設計、合成、包被、性能驗證、檢測、數據分析等。 (2)膜蛋白:包括EVs和外泌體膜上各種蛋白靶標,含各類直標/非直標熒光抗體的篩選、包被、性能驗證、檢測、數據分析等。
RNA檢測 |
Zhou J, Kwak KJ, Wu Z, Yang D, Li J, Chang M, Song Y, Zeng H, Lee LJ, Hu J, Bai C. Cell Physiol Biochem. 2018;47(5):1909-1924.
CD63和PD-L1兩種膜蛋白的EV亞群鑒定 Double immunofluorescence staining of CD63 and PD-L1 membrane protein. |
Zhou J, Wu Z, Hu J, Yang D, Chen X, Wang Q, Liu J, Dou M, Peng W, Wu Y, Wang W, Xie C, Wang M, Song Y, Zeng H, Bai C. Sci Adv. 2020 Nov 20;6(47):eabc1204.
1. 細胞轉染(圖A和圖B) 2. Confocal高清成像(圖A)3. TIRF高清成像(圖B)
A | Confocal |
B | TIRF |
前列腺癌細胞株LNCaP免疫熒光染色
Double immunofluorescence staining for target protein of LNCaP cells |
A | Confocal |
B | TIRF |
肺癌細胞株A549膜蛋白雙免疫熒光染色
Double immunofluorescence staining for membrane protein of A549 cells |
Zhou J, Wu Z, Hu J, Yang D, Chen X, Wang Q, Liu J, Dou M, Peng W, Wu Y, Wang W, Xie C, Wang M, Song Y, Zeng H, Bai C. Sci Adv. 2020 Nov 20;6(47):eabc1204.
本公司配備NIKON全內反射熒光顯微鏡(Total Internal Reflection Fluorescence Microscope,簡稱TIRF),高清成像,并擁有多項AI數據分析軟件著作權專利。
可根據客戶需求設計并合成特異性靶向目的基因的分子信標(含miRNA、mRNA、circRNA、lncRNA)